高效液相色譜是一種高效、精準(zhǔn)的色譜分離技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于藥物分析、生化標(biāo)志物檢測、環(huán)境污染物檢測等領(lǐng)域。下面將介紹
高效液相色譜系統(tǒng)的操作方法。
I.原料準(zhǔn)備
1.溶劑：高純度有機溶劑，如純度達(dá)到HPLC級別的甲醇、乙腈、乙醇等。
2.樣品：要求樣品在水中溶解度較高，通常采用精密天平稱取數(shù)毫克的樣品，加入適量的有機溶劑中，并攪拌均勻。
3.內(nèi)標(biāo)：內(nèi)標(biāo)的加入可提高分析方法的準(zhǔn)確度和精確度，如對組蛋白酶結(jié)合位點的鋅離子測定操作，可加入5-氧化-硫代硫糖酸(5-OSA)作為內(nèi)標(biāo)。
II.儀器操作
1.開機：打開HPLC系統(tǒng)電源，啟動軟件，確認(rèn)參數(shù)設(shè)置無誤。
2.準(zhǔn)備流動相：按照實驗方案中流動相的比例將水、有機溶劑調(diào)配好。將混合好的流動相用過濾器過濾，并用氣流除去氣泡，以免影響儀器和分析結(jié)果。
3.填充色譜柱：色譜柱是HPLC系統(tǒng)的核心部件。填充色譜柱前，將色譜柱和進(jìn)樣器、檢測器與儀器連接好。將色譜柱加熱至適宜的溫度后，開啟泵浦，將流動相通過色譜柱包層填充物，直至色譜柱內(nèi)充滿。
4.樣品處理：可采用樣品預(yù)染色、前處理、提取等方法，以保證色譜分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。
5.樣品進(jìn)樣：將樣品針頭插入進(jìn)樣口，將樣品推入進(jìn)樣器中，通過手動或自動進(jìn)樣器，將樣品送入色譜柱進(jìn)行分離。
6.檢測：將檢測器的信號記錄下來，經(jīng)過數(shù)據(jù)處理和分析，得出樣品中目標(biāo)分量的濃度或含量。
III.實驗結(jié)果分析
1.結(jié)果判定：分析結(jié)果中，樣品和內(nèi)標(biāo)物的峰形、峰高、保留時間等是判斷分析結(jié)果是否準(zhǔn)確、可靠的關(guān)鍵。
2.分析數(shù)據(jù)處理：對于分析結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行合理的數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，通過計算、繪圖等方法，得出樣品中目標(biāo)分量的含量、純度等數(shù)據(jù)。
綜上所述，高效液相色譜操作方法需要嚴(yán)格按照實驗方案進(jìn)行，有機溶劑、樣品、內(nèi)標(biāo)等原料的使用要求嚴(yán)格，同時要認(rèn)真操作儀器，遵守維護(hù)要求，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
